| 描述 |
Nazartinib mesylate (EGF816 mesylate) 是一种新颖的 EGFR 抑制剂,对 EGFR(L858R/790M) 突变体的 Ki 和 Kinact 值分别为 31 nM 和 0.222 min−1。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
EGFRL858R/T790M:31 nM (Ki)
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| 体外研究 |
Nazartinib(EGF816)对突变细胞系具有抑制作用,在H1975,H3255和HCC827中IC50分别为4,6,2nM,并显示出改善的ADME和PK特性[1]。 Nazartinib(EGF816)显示H3255,HCC827和H1975细胞系中pEGFR水平的有效抑制,EC50值分别为5,1和3nM。 Nazartinib抑制细胞增殖,H3255,HCC827和H1975的EC50值分别为9,11和25nM。 Nazartinib在HCC827和H1975上的OC50(化合物浓度为50％占有率)值分别为2和5 nM [2]。
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| 体内研究 |
在H1975小鼠异种移植模型中,Nazartinib(EGF816; 50和20mg/kg或25mg/kg,po)显示剂量依赖性功效,在最高测试剂量(50mg/kg)下几乎完全肿瘤细胞消退[1]。在H1975小鼠模型中,Nazartinib(EGF816; 10 mg/kg,po)诱导肿瘤生长抑制,T/C(肿瘤/对照体积)为29％,当剂量为30和100 mg/kg时,实现肿瘤消退。 (T/C,分别为-61％和-80％)。在H3255异种移植模型中,Nazartinib(30mg/kg,po)显示出显着的抗肿瘤活性。 Nazartinib对89种肺癌细胞系的抗增殖活性表明,Nazartinib选择性抑制含有催化结构域突变的EGFR细胞系[2]。
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| 激酶实验 |
将EGFR L858R和T790M-L858R突变体的重组激酶结构域与Nazartinib一起温育以确认EGFR的共价修饰和内收位点。将重组酶在室温下与20倍摩尔过量的化合物在40mM Tris，pH8,500mM NaCl，1％甘油，5mM TCEP中孵育1小时。通过加入二硫苏糖醇（DTT，80倍过量化合物）淬灭反应并转移至冰中。通过加入等体积的6M Guan HCl，100mM Tris，pH8,20mM DTT，10mM TCEP并在室温下温育15分钟，处理三分之一的反应（10μL）用于完整的MS。完整的MS分析在Agilent 6520 QToF质谱仪上进行，该质谱仪配有双喷雾离子源（IS为4500 V，碎片为250 V，fas温度为350°C，分离器为75 V）。将样品注入PLRP-S柱（2.1 mm×50 mm），加热至60°C，以500μL/ min和3％B脱盐2分钟，然后以3-50％的快速梯度洗脱B在3分钟内（B，0.1％甲酸）。数据在MassHunter中进行分析，用于自动峰选择，积分和光谱反褶积，质量范围为15 000-75 000 Da。
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| 细胞实验 |
将细胞以500个细胞/孔接种在维持培养基中的固体白色384孔板中。将连续稀释的化合物转移至细胞。 3天后，通过CellTiter-Glo测量细胞活力。使用Bright-Glo荧光素酶测定系统在化合物处理后2天测量BaF3细胞活力。将发光读数标准化为0.1％DMSO处理的细胞和空孔。马萨诸塞州综合医院生产了5种EGFR TKI抗性细胞系。 MGH134，MGH121，MGH141和MGH157来源于对获得性T790M突变的厄洛替尼产生抗性的患者。通过用吉非替尼长时间处理MGH119在体外产生MGH119-R。测试了纳扎替尼对这些细胞系的敏感性。
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| 动物实验 |
携带H1975肿瘤的Foxn1裸鼠随机化并用于功效研究。将化合物配制在0.5％MC，0.5％吐温80悬浮液制剂中，并通过口服强饲法以10μL/ g动物体重的给药体积给药。每组中的动物接受一种口服剂量的载体（n = 6）或不同的测试化合物（每个剂量组中n = 6）。在第5天最后一次给药后30分钟，3小时，7小时和24小时收集血浆样品用于PK测量。每天监测体重，并且体重的％变化计算为[（BWcurrent-BWinitial）/ （BWinitial）]×100。数据表示为从治疗开始之日起的体重变化百分比。在功效研究期间评估肿瘤大小三次，持续5天。通过使用卡尺测量来确定肿瘤大小。用公式（长×宽×宽）/ 2计算肿瘤体积。
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| 参考文献 |
[1]. Lelais G, et al. Discovery of (R,E)-N-(7-Chloro-1-(1-[4-(dimethylamino)but-2-enoyl]azepan-3-yl)-1H-benzo[d]imidazol-2-yl)-2-methylisonicotinamide (EGF816), a Novel, Potent, and WT Sparing Covalent Inhibitor of Oncogenic (L858R, ex19del) and Resistant (T79 [2]. Jia Y, et al. EGF816 Exerts Anticancer Effects in Non-Small Cell Lung Cancer by Irreversibly and Selectively Targeting Primary and Acquired Activating Mutations in the EGF Receptor. Cancer Res. 2016 Mar 15;76(6):1591-602
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